Los genomas de rotavirus se distribuyen entre 11 moléculas de ARN distintas, todas las cuales deben empaquetarse selectivamente durante el ensamblaje del virus. Esto probablemente ocurre a través de interacciones de ARN específicas de secuencia facilitadas por la chaperona de ARN NSP2. Aquí, informamos que NSP2 autorregula su actividad de chaperona a través de su región C-terminal (CTR) que promueve las interacciones ARN-ARN al limitar su actividad de desenrollado de hélice. Inesperadamente, los datos de proteómica estructural revelaron que el CTR no interactúa directamente con el ARN, mientras que acelera la liberación de ARN de NSP2. Las reconstrucciones con microscopía crioelectrónica de un complejo NSP2-ARN revelan un parche ácido muy conservado en el CTR, que se inclina hacia el ARN unido. La replicación del virus fue anulada por mutaciones disruptoras de carga dentro del parche ácido, pero completamente restaurada por mutaciones conservadoras de carga.